Desarrollo de un método serológico basado en neutrófilos para la detección de enfermedad subclínica en convivientes de pacientes con tuberculosis

Abstract

RESUMEN: La tuberculosis (TB) es causada por Mycobacterium tuberculosis (MTB) y con menos frecuencia por otras micobacterias del Complejo M.tuberculosis. Actualmente la enfermedad representa un grave problema de salud pública en los países subdesarrollados y también en algunos países desarrollados. La TB es la enfermedad infecciosa causada por un solo microorganismo que más muertes provoca. Su presentación ocurre tanto en forma activa como en forma latente. Una tercera parte de la población mundial presenta la enfermedad latente pero sólo el 5% de los casos desarrolla la forma activa. Los contactos familiares de los pacientes con tuberculosis son los individuos con mayor riesgo de contraer la enfermedad. El único método que existe para el diagnóstico de la enfermedad latente es el IGRA (interferon gamma released assay), pero este método no distingue la forma activa de la latente. La inmunopatología de la TB ha sido ampliamente estudiada y se sabe que los neutrófilos participan activamente en ella, sin embargo, el papel que juegan los neutrófilos en la inmunidad contra la TB es controversial ya que no es clara su capacidad para eliminar al bacilo. Muchas células en los granulomas en la tuberculosis producen y liberan infinidad de sustancias, incluyendo citocinas y productos de la degradación bacteriana y celular los cuales se vierten a la sangre y participan, seguramente, en la patología de la enfermedad. En este trabajo evaluamos el efecto de los sueros de los pacientes con tuberculosis y sus convivientes sobre los neutrófilos de donadores sanos. Encontramos que los sueros indujeron cambios morfológicos nucleares y citoplasmáticos compatibles con Netosis y apoptosis. Buscamos el factor sérico inductor de los cambios y encontramos que las citocinas TNFα, IFNγ, IL-8 e IL-6 no estuvieron relacionadas con los cambios observados en neutrófilos. Los anticuerpos y los complejos inmunes tampoco tuvieron relación con los efectos de los sueros. Eliminamos la posibilidad de las micobacterias como responsables de los cambios porque el efecto de los sueros no se perdió cuando estos se filtraron a través de membranas de 0.22 micras. Los antígenos solubles extraídos de las micobacterias, en cambio, mostraron los efectos observados con los sueros. Concluimos que son los antígenos vertidos en la sangre los responsables de los cambios en neutrófilos. El desarrollo de una metodología para cuantificar antígenos micobacterianos en circulación junto con la prueba del efecto de los sueros sobre los neutrófilos puede ser de gran utilidad para detectar los casos de tuberculosis subclínica entre los convivientes de los pacientes y el tratamiento profiláctico de estos individuos puede ser una forma de detener el desarrollo de la enfermedad, rompiendo así la cadena de infección. ABSTRACT: Tuberculosis (TB), caused by Mycobacterium tuberculosis (MTB) and less frequently by other mycobacteria of the complex tuberculosis, is currently a major public health problem mainly in poor (“developing”) countries but also in some developed ones. Although it is a disease primarily of lung, it may also affect any other organ causing extra pulmonary tuberculosis. When acquired it may stay as a latent infection or it may progress to the active disease. Diagnoses of pulmonary tuberculosis does not represent a problem as clinical, bacteriological and radiological information leads to unequivocal diagnoses. Extra pulmonary tuberculosis, for instance renal, nodular, meningeal or intestinal tuberculosis, may represent a problem because no typical signs or symptoms of the disease are evident. Diagnoses in these cases is achieved by means of molecular or immunological methodology such as the interferon gamma releasing assay (IGRA). Latent tuberculosis may also be detected by these methodologies, but their general application is prohibitive due to their high costs. Tuberculosis is an infectious disease transmitted from person to person, and persons in major risk to become infected are household contacts. Most household contacts are indeed infected and many of them (probably) bear the subclinical disease (progressing to the clinical disease). Identifying these individuals might advise for their prophylactic treatment, thus disrupting the transmission of the disease. In the present study we found that sera of tuberculous patients and sera of some of their household contacts induce nuclear changes (pyknosis, apoptosis and netosis) in neutrophils of healthy donors. We discarded IL-8, IL-6, TNFα, IFNγ, immune complexes and antimycobacterial antibodies as the serum factors responsible for the changes in neutrophils, however we identified mycobacterial antigens as the possible nuclear-changes inducers. We are developing a full neutrophil-based methodology to detect those household contacts with subclinical tuberculosis in risk of developing the clinical disease.