Efecto de la leptina y el ácido valproico en la activación de mastocitos

Abstract

RESUMEN: En los mastocitos, uno de los receptores más estudiados es el receptor de alta afinidad para la inmunoglobulina E (FcƐRI) ya que su activación está relacionada a la anafilaxis dependiente de IgE. La unión de la IgE a su receptor FcƐRI y posterior activación por el antígeno específico induce desgranulación, liberación de mediadores pro-inflamatorios y la síntesis de novo, en los mastocitos. El entrecruzamiento de complejo IgE-FcƐRI en mastocitos puede ser modulado por diferentes moléculas, como citocinas, hormonas y medicamentos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la modulación de la respuesta de los mastocitos mediada por IgE la hormona leptina (Lep) y por el fármaco ácido valproico (VAP). Los mastocitos se obtuvieron a partir de medula ósea de ratón cultivada en medio suplementado con IL-3 . Se evaluó por citometría de flujo la desgranulación in vitro mediada por IgE-FcƐR en presencia de VAP o Lep. A partir de esta señal se cuantificaron citocinas mediante la técnica de ELISA y para el caso de las células tratadas con VAP, se evaluaron moléculas de las principales vías de señalización por citometría de flujo. Para el caso de Lep, los mastocitos tienden a presentar una mayor desgranulación de manera dosis dependiente. Al evaluar la producción de citocinas se encontró que a las 24 horas, los mastocitos activados y que estuvieron en presencia de Lep muestran una tendencia a incrementar la producción de citocinas. Por otra parte, el VAP a concentraciones de 1 y 2 mM no mostró un efecto tóxico en los BMMC. Cuando los mastocitos fueron incubados en presencia de VAP y activados a través de FcƐRI, presentaron una menor desgranulación, y baja producción de citocinas en comparación con el grupo control. Además el VAP disminuyó la expresión de FcƐRI en superficie, pero no de otros receptores en la membrana. Al evaluar la fosforilación de proteínas que participan en la vía de señalización, no se encontró diferencias significativas en la intensidad media de fluorescencia de p-SYK, p-ERK ½, p-AKT y p-P38 pero al analizar p-PLCγ se observó una disminución significativa en el grupo tratado con VAP, lo que podría estar asociado a una disminución en la producción de citocinas y en la desgranulación. Estos resultados demuestran que la activación de los mastocitos a través del entrecruzamiento del receptor FcƐRI por IgE puede ser regulada por leptina y VAP.

ABSTRACT: Mast cells act as an important mediator of immune response through a wide array of cell membrane receptors. One of the most studied receptors is FcƐRI, whose signalling is dependent of IgE and its activation is associated with type I hypersensitivity reactions. FcƐRI mast cell activation by IgE and antigen, induce degranulation, release of leukotrienes and de novo synthesis of pro-inflammatory cytokines. Different molecules, such as cytokines, hormones and drugs, can modulate mast cell crosslinking of IgE-FcƐRI complex. The aim of our research was to evaluate if the hormone leptin (Lep) and the drug valproate (VAP), regulate mast cell activation by FcƐRI crosslinking. Mast cells were obtained from mouse bone marrow, and cultivated on RPMI medium with 10% SFB and IL-3 (30 ng/ml) for 5-6 weeks. IgE-FcƐR degranulation was evaluate by flow cytometer with or without Lep or VAP. In addition, we quantified cytokines by ELISA. Leptin induced a higher degranulation in mast cells activated through IgE-FcƐRI than control group, and was dose dependent. Leptin induced a tendency to increase cytokines release at 24 hours in mast cells after activation through FcƐRI. On the other hand, 1 and 2 mM of VAP did not show a toxic effect on mast cells. We noticed that VPA attenuated mast cell degranulation and cytokines release after FcƐRI crosslinking. Interestingly, VAP treated mast cells showed diminished expression of FcƐRI on cell membrane, but not other recpetors. When we evaluated the phosphorylation of proteins that are important in intracellular signalling cascade involved in the FcƐRI-IgE mast cell response, we did not find a significative difference in the median fluorescence intensity (MFI) of phosphorylated SYK, ERK ½, AKT and P38 on cells treated with VAP. Nevertheless, phosphorylated PLCγ shown a significant reduction in MFI by VAP which could be related to the reduced release of cytokines and degranulation. These results indicate that mast cell response to IgE-FcƐRI crosslinking, can be modulated by leptin and valproic acid.