RESUMEN: Entamoeba histolytica es el agente causal de la amibiasis y de acuerdo a la OMS (Organización Mundial de la Salud) es la tercera causa de muerte provocada por parásitos protozoarios. Desafortunadamente la resistencia que presenta este parásito a diversos a fármacos ha surgido como un impedimento para su control. El fenotipo de Resistencia a Múltiples Fármacos (por sus siglas en inglés, MDR) es uno de los mecanismos de resistencia observados en este organismo y el gen EhPgp5 es uno responsables de este fenotipo. Se ha demostrado que la expresión del gen EhPgp5 en trofozoítos crecidos en presencia de emetina es inducida por la presencia de un elemento de respuesta a choque térmico (por sus siglas en inglés, HSE) en su promotor, el cual potencialmente puede ser reconocido por un factor de transcripción de choque térmico, (por sus siglas en inglés, HSTF). En E. histolytica siete genes Ehhstfs han sido identificados, de los cuales los genes Ehhstf5, Ehhstf6 y Ehhstf7 se sobreexpresan en trofozoítos expuestos a emetina. De estos, el gen Ehhstf7 es el que presenta la mayor expresión bajo esta condición. Motivo por el cual la presente investigación tuvo como objetivo principal evaluar el efecto del silenciamiento del gen Ehhstf7 de E. histolytica en la resistencia emetina. A partir de trofozoítos expuestos a emetina en una cinética de 0 a 48 h se determinó que los genes Ehhstf5, Ehhstf6 y Ehhstf7 se expresan de manera secuencial, presentando sus mayores niveles de expresión a las 8, 48 y 24 h respectivamente. Posteriormente, se realizó el silenciamiento del gen Ehhstf7 a través de siRNAs sintéticos en trofozoítos de E. histolytica expuestos a emetina observando una reducción en la expresión del transcrito de 1.87 y 2.48 veces a las 16 y 24 h, respectivamente. De manera interesante al silenciar al gen Ehhstf7 también se observó una reducción de 40.67 veces la expresión del gen EhPgp5, esta correlación sugiere que el gen Ehhstf7 participa en la activación transcripcional del gen EhPgp5 cuando los trofozoítos son expuestos a emetina.
ABSTRACT: Entamoeba histolytica is the ethiological agent of amebiasis and according to WHO (World Health Organization) is the third cause of death provoked by protozoan parasites. Unfortunately, the resistance of this parasite to different drugs has emerged as an impediment to its control. The MDR (Multidrug-resistance) phenotype is one of the mechanisms of resistance observed in this organism and the EhPgp5 gene is one responsible for this phenotype. Expression of the EhPgp5 gene in trophozoites grown with emetine has been shown to be induced by the presence of a HSE element in its promoter, which potentially will be recognized by an HSTF (Heat Shock Transcription Factor). In E. histolytica seven Ehhstfs genes have been identified, of which the genes Ehhstf5, Ehhstf6 and Ehhstf7 are overexpressed in trophozoites exposed to emetine. Of these, the Ehhstf7 gene present the highest expression under this condition. By the reason the aim the present research was to evaluate the effect of the silencing of the Ehhstf7 gene of E. histolytica in the emetine resistance. It was determined that the Ehhstf5, Ehhstf6 and Ehhstf7 genes in a 0 - 48 h kinetic with thophozoites expose to emetine are expressed in a sequencial manner showing the major expression levels at 8, 48 and 24 h respectively. Subsequently, silencing of the Ehhstf7 gene was performed through synthetic siRNAs in trophozoites of E. histolytica exposed to emetine, observing a reduction in transcript expression of 1.87 and 2.48 times at 16 and 24 h, respectively. Interestingly, by silencing the Ehhstf7 gene, a 40.67-fold reduction in EhPgp5 gene expression was observed, this correlation suggests that the EHHSTF7 factor participates in the transcriptional activation of the EhPgp5 gene when t are exposed to emetine.
